大熊猫犬瘟热病毒H基因重组山羊痘病毒的构建和鉴定

程松1 王和兴2 郑敏3 罗满林4 单芬1 李婉萍1 陈武1

(1.广州动物园, 广州 510070)
(2.红河州农业局红河州动物疫病预防控制中心, 蒙自 661199)
(3.广西动物疫病预防控制中心, 南宁 530001)
(4.华南农业大学兽医学院, 广州 510642)
【创新点】通过同源重组,10轮加压筛选纯化、PCR与Western Blot的鉴定,成功获得了表达大熊猫犬瘟热病毒H基因重组病毒vpTK-H-Eg。

【摘要】本研究参照GenBank上已公布的大熊猫犬瘟热病毒(CDV)H编码的基因序列,对其抗原保守结构和识别区域进行修饰,将CDV保护性抗原H基因克隆到pMDTK-pEL载体中,然后运用酶切、连接将表达盒PELH构建到pTK-Eg载体中,从而获得重组转移载体质粒pTK-H-Eg。将重组转移载体质粒pTK-H-Eg与GTPV AV41株共转染BHK细胞,使其在细胞内发生同源重组,获得重组CDV的H基因的山羊痘病毒,然后在Vero细胞上加压筛选,利用gpt培养基筛选到稳定表达EGFP的重组病毒。通过PCR、免疫荧光以及Western Blot鉴定,证明CDV H基因成功构建到GTPV基因组中,并且在细胞中获得了正确表达。本研究获得了表达CDV H基因重组山羊痘病毒,并命名为vpTK-H-Eg。

【关键词】 犬瘟热病毒(CDV); 同源重组; 重组山羊痘病毒;

【DOI】

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ISSN:1000-8721

CN: 11-1865/R

Vol 34, No. 04, Pages 550-556

June 2018

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